DNA-Ligation

Berechnen Sie die genaue Masse der Insert-DNA, die für ein bestimmtes Molverhältnis mit Ihrem Vektor benötigt wird.

Reaktionsparameter

Vektormasse

Unit

Vektorlänge

Unit

Länge einfügen

Unit

Molverhältnis (Einfügen:Vektor)

Erforderlicher Einsatz

50.00ng

Erforderliche Einsatzmasse

Ratio3:1I:V

Total DNA100.0ng

Verhältnis vs. Einsatzmasse

Overview

Durch die Ligation werden zwei DNA-Fragmente verbunden: ein Vektor (das Rückgrat) und ein Insert (das interessierende Gen). Das Ausbalancieren der Anzahl der DNA-Moleküle (molares Verhältnis) ist entscheidend; Zu viel Einsatz kann zu Verkettungen führen, während zu wenig das Risiko einer Kollision zwischen kompatiblen Enden verringert.

💡

Pro Tips

Ein Verhältnis von 3:1 (Einfügen:Vektor) ist ein Standardausgangspunkt für die meisten Sticky-End-Ligationen.
Blunt-End-Ligationen profitieren häufig von höheren Verhältnissen (z. B. 5:1 oder 10:1) und längeren Inkubationszeiten.
Klebrige Enden (kohäsive Enden) haben überhängende Basen, die für Spezifität und Stabilität während der Reaktion sorgen.
Stellen Sie sicher, dass die DNA von hoher Qualität ist. Salze oder Ethanol aus Reinigungskits können die T4-DNA-Ligase hemmen.
Fügen Sie immer eine „Nur Vektor“-Kontrolle (mit Ligase) hinzu, um den Selbstligationshintergrund zu prüfen.

Fun Facts

"Die T4-DNA-Ligase stammt vom T4-Bakteriophagen und benötigt ATP als Cofaktor."
"DNA-Ligase wurde 1967 von mehreren Laboren fast gleichzeitig entdeckt."
"In Ihrem Körper sind DNA-Ligasen ständig damit beschäftigt, Einzelstrangbrüche in Ihrem Genom zu reparieren."
"Gibson Assembly und Golden Gate Cloning sind moderne Alternativen, die verschiedene Enzyme verwenden, um eine nahtlose Ligation zu erreichen."

Formula: Masse einfügen = (Vektormasse × [Einfügegröße / Vektorgröße]) × Verhältnis

Used with this

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Erforderliche Einsatzmasse

Ratio3:1I:V

Total DNA100.0ng

Verhältnis vs. Einsatzmasse

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Ein Verhältnis von 3:1 (Einfügen:Vektor) ist ein Standardausgangspunkt für die meisten Sticky-End-Ligationen.
Blunt-End-Ligationen profitieren häufig von höheren Verhältnissen (z. B. 5:1 oder 10:1) und längeren Inkubationszeiten.
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Stellen Sie sicher, dass die DNA von hoher Qualität ist. Salze oder Ethanol aus Reinigungskits können die T4-DNA-Ligase hemmen.
Fügen Sie immer eine „Nur Vektor“-Kontrolle (mit Ligase) hinzu, um den Selbstligationshintergrund zu prüfen.

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