Proteinkonzentration

Quantifizieren Sie Proteine in Lösung mithilfe der spektrophotometrischen Absorption (A280) oder der Warburg-Christian-Korrekturmethode.

Spektrophotometrie

Absorption bei 280 nm

Verdünnungsfaktor

Extinktionskoeffizient (ε)

Proteinquantifizierung

0.750mg/mL

Proteinkonzentration

In 10 μL7.5μg

A260/A2800.50ratio

Beer-Lambert Projection

Overview

Die Proteinquantifizierung durch Absorption bei 280 nm ist eine zerstörungsfreie Methode, die auf den in der Probe vorhandenen aromatischen Aminosäuren (Trp, Tyr) und Disulfidbindungen basiert.

💡

Pro Tips

A280-Methode: Am besten für gereinigte Proteine mit bekanntem Extinktionskoeffizienten geeignet.
Warburg-Christian: Am besten geeignet, wenn der Verdacht auf eine Nukleinsäurekontamination besteht (unter Verwendung des A260/A280-Verhältnisses).
Die genauesten Ergebnisse werden zwischen 0,1 und 1,5 Absorptionseinheiten erzielt.
Nullen Sie das Spektrophotometer immer mit dem entsprechenden Pufferrohling.

Fun Facts

"A280 basiert auf Tryptophan- und Tyrosinresten; Proteine, denen diese fehlen, können auf diese Weise nicht gemessen werden."
"Ein reines Protein hat typischerweise ein A260/A280-Verhältnis > 1,8; niedrigere Werte deuten auf eine DNA/RNA-Kontamination hin."
"Die Methode ist zerstörungsfrei und ermöglicht die Probenrückgewinnung."

Formula: A280 = ε × c × l (Beer-Lambert-Gesetz)

Used with this

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Die genauesten Ergebnisse werden zwischen 0,1 und 1,5 Absorptionseinheiten erzielt.
Nullen Sie das Spektrophotometer immer mit dem entsprechenden Pufferrohling.

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"A280 basiert auf Tryptophan- und Tyrosinresten; Proteine, denen diese fehlen, können auf diese Weise nicht gemessen werden."
"Ein reines Protein hat typischerweise ein A260/A280-Verhältnis > 1,8; niedrigere Werte deuten auf eine DNA/RNA-Kontamination hin."
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