Ligadura de ADN

Calcule la masa precisa de ADN insertado necesaria para una relación molar específica con su vector.

Parámetros de reacción

masa vectorial

Unit

Longitud del vector

Unit

Longitud de inserción

Unit

Relación molar (Insertar:Vector)

Inserto requerido

50.00ng

Masa de inserción requerida

Ratio3:1I:V

Total DNA100.0ng

Relación versus masa de inserción

Overview

La ligadura une dos fragmentos de ADN: un vector (la columna vertebral) y un inserto (el gen de interés). Equilibrar el número de moléculas de ADN (proporción molar) es fundamental; Demasiado inserto puede provocar concatémeros, mientras que muy poco reduce la posibilidad de colisión entre extremos compatibles.

💡

Pro Tips

Una proporción de 3:1 (Inserto:Vector) es un punto de partida estándar para la mayoría de las ligaduras con extremos adhesivos.
Las ligaduras de extremos romos a menudo se benefician de proporciones más altas (p. ej., 5:1 o 10:1) y tiempos de incubación más prolongados.
Los extremos pegajosos (extremos cohesivos) tienen bases sobresalientes que proporcionan especificidad y estabilidad durante la reacción.
Garantizar que el ADN sea de alta calidad; Las sales o el etanol de los kits de purificación pueden inhibir la ADN ligasa T4.
Incluya siempre un control 'Sólo vector' (con ligasa) para comprobar los antecedentes de autoligado.

Fun Facts

"La ADN ligasa T4 se deriva del bacteriófago T4 y requiere ATP como cofactor."
"La ADN ligasa fue descubierta en 1967 por varios laboratorios casi simultáneamente."
"En su cuerpo, las ADN ligasas trabajan constantemente reparando roturas de una sola hebra en su genoma."
"Gibson Assembly y Golden Gate Cloning son alternativas modernas que utilizan diferentes enzimas para lograr una ligadura perfecta."

Formula: Insertar masa = (Masa del vector × [Tamaño de inserción / Tamaño del vector]) × Relación

Used with this

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Incluya siempre un control 'Sólo vector' (con ligasa) para comprobar los antecedentes de autoligado.

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