Temperatura de recocido

Determine la temperatura óptima de recocido de PCR en función de los puntos de fusión del cebador y del ADN objetivo.

Parámetros térmicos

Primer Tm (punto de fusión)

Unit

Tm del ADN objetivo

Unit

Configuración de PCR

66.8°C

Temperatura de recocido óptima

Imprimación Tm65.5°C

Ta (Tm-5)60.5°C

Method Comparison

Rychlik (Used)66.8°C

Standard (Tm - 5)60.5°C

*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

Overview

La temperatura de hibridación (Ta) es el paso crítico en la PCR donde los cebadores se unen al ADN objetivo. Esta temperatura debe estar equilibrada: lo suficientemente alta para garantizar que los cebadores se unan sólo con la combinación perfecta (especificidad), pero lo suficientemente baja para que sea eficaz. Esta calculadora utiliza la fórmula de Rychlik, que considera tanto la estabilidad de la imprimación como la del producto.

💡

Pro Tips

La Ta óptima suele estar entre 3 y 5 °C por debajo de la Tm inferior de su par de cebadores.
Si ve "manchas" no específicas o bandas adicionales, intente aumentar la Ta entre 1 y 2 °C.
Si no tiene producto, disminuya la Ta. Es posible que sus cebadores no se unan.
Un contenido de GC del 40-60 % es ideal para que los cebadores eviten estructuras secundarias o una unión débil.
La PCR de aterrizaje comienza con una Ta alta y la disminuye en cada ciclo, lo que garantiza que se produzca primero la unión más específica.

Fun Facts

"La Taq polimerasa, la enzima que impulsa la PCR, proviene de Thermus Aquaticus, una bacteria que se encuentra en las aguas termales del Parque Nacional de Yellowstone."
"La invención de la PCR por Kary Mullis en 1983 le valió el Premio Nobel de Química."
"Antes de los termocicladores automatizados, los científicos tenían que mover manualmente los tubos entre tres baños de agua de diferentes temperaturas."
"Las enzimas modernas de 'Fast PCR' pueden completar 40 ciclos en menos de 15 minutos."

Formula: Ta = 0,3 × Tm(cebador) + 0,7 × Tm(objetivo) - 14,9

Used with this

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Acres por hora

Calcule la velocidad de trabajo de campo y la capacidad de los equipos agrícolas.

Frecuencia alélica

Calcule las frecuencias de alelos y genotipos dentro de una población utilizando el modelo de equilibrio de Hardy-Weinberg.

Calculadora de Gestación de Alpaca

Calcule la fecha de cría (nacimiento) de sus alpacas y realice un seguimiento del progreso del embarazo.

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*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

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La Ta óptima suele estar entre 3 y 5 °C por debajo de la Tm inferior de su par de cebadores.
Si ve "manchas" no específicas o bandas adicionales, intente aumentar la Ta entre 1 y 2 °C.
Si no tiene producto, disminuya la Ta. Es posible que sus cebadores no se unan.
Un contenido de GC del 40-60 % es ideal para que los cebadores eviten estructuras secundarias o una unión débil.
La PCR de aterrizaje comienza con una Ta alta y la disminuye en cada ciclo, lo que garantiza que se produzca primero la unión más específica.

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"La Taq polimerasa, la enzima que impulsa la PCR, proviene de Thermus Aquaticus, una bacteria que se encuentra en las aguas termales del Parque Nacional de Yellowstone."
"La invención de la PCR por Kary Mullis en 1983 le valió el Premio Nobel de Química."
"Antes de los termocicladores automatizados, los científicos tenían que mover manualmente los tubos entre tres baños de agua de diferentes temperaturas."
"Las enzimas modernas de 'Fast PCR' pueden completar 40 ciclos en menos de 15 minutos."

Formula: Ta = 0,3 × Tm(cebador) + 0,7 × Tm(objetivo) - 14,9

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