Concentrazione del DNA

Calcolare la concentrazione dell'acido nucleico dalle letture dello spettrofotometro A260 utilizzando la legge di Beer-Lambert.

Lettura dei parametri

Tipo di campione

A260 Assorbanza

Lunghezza del percorso (cm)

Fattore di diluizione

Risultato della concentrazione

25.00µg/mL

Concentrazione calcolata

Fattore di estinzione50µg/unit

Absorbance0.5AU

Curva di concentrazione

Overview

La determinazione della concentrazione degli acidi nucleici (DNA e RNA) è fondamentale nella biologia molecolare. Questo viene calcolato utilizzando la legge di Beer-Lambert basata sull'assorbanza a 260 nm. I fattori standard rappresentano la concentrazione richiesta per produrre un A260 di 1,0 con un percorso ottico di 1 cm.

💡

Pro Tips

Fattore di conversione del dsDNA: 50 µg/mL per 1,0 unità A260.
Fattore di conversione ssDNA: 33 µg/mL per 1,0 unità A260.
Fattore di conversione dell'RNA: 40 µg/mL per 1,0 unità A260.
Un rapporto A260/A280 di ~1,8 è generalmente accettato come "puro" per il DNA, mentre ~2,0 è puro per l'RNA.
Controlla anche il rapporto A260/A230; valori inferiori a 1,5 possono indicare contaminazione da carboidrati o fenoli.

Fun Facts

"Gli acidi nucleici assorbono la luce UV a 260 nm a causa della struttura di risonanza delle loro basi azotate (A, T, C, G)."
"Friedrich Miescher isolò per primo il DNA nel 1869, chiamandolo “nucleina”."
"Gli spettrofotometri per piccoli volumi NanoDrop utilizzano la tensione superficiale per trattenere una goccia di campione da 1-2 µL tra due piedistalli ottici."
"La legge di Beer-Lambert presuppone una relazione lineare, che spesso si interrompe in caso di assorbanza molto elevata (>2,0 AU)."

Formula: Conc = (A260 / Lunghezza del percorso) × Diluizione × Fattore

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