Legatura del DNA

Calcola la massa precisa del DNA inserito necessaria per un rapporto molare specifico con il tuo vettore.

Parametri di reazione

Massa vettoriale

Unit

Lunghezza del vettore

Unit

Inserisci lunghezza

Unit

Rapporto molare (inserire:vettore)

Inserimento obbligatorio

50.00ng

Massa di inserimento richiesta

Ratio3:1I:V

Total DNA100.0ng

Rapporto rispetto alla massa dell'inserto

Overview

La legatura unisce due frammenti di DNA: un vettore (la spina dorsale) e un inserto (il gene di interesse). Il bilanciamento del numero di molecole di DNA (rapporto molare) è fondamentale; troppo inserto può portare a concatenamenti, mentre troppo poco riduce la possibilità di collisione tra estremità compatibili.

💡

Pro Tips

Un rapporto 3:1 (Inserisci:Vettore) è un punto di partenza standard per la maggior parte delle legature con estremità adesive.
Le legature a estremità smussate spesso traggono vantaggio da rapporti più elevati (ad esempio, 5:1 o 10:1) e tempi di incubazione più lunghi.
Le estremità appiccicose (estremità coesive) hanno basi sporgenti che forniscono specificità e stabilità durante la reazione.
Garantire che il DNA sia di alta qualità; i sali o l'etanolo contenuti nei kit di purificazione possono inibire la T4 DNA Ligase.
Includere sempre un controllo "Solo vettore" (con ligasi) per verificare lo sfondo dell'autolegatura.

Fun Facts

"La DNA ligasi T4 deriva dal batteriofago T4 e richiede ATP come cofattore."
"La DNA ligasi è stata scoperta nel 1967 da diversi laboratori quasi contemporaneamente."
"Nel tuo corpo, le ligasi del DNA sono costantemente al lavoro per riparare le rotture del singolo filamento nel tuo genoma."
"Gibson Assembly e Golden Gate Cloning sono alternative moderne che utilizzano diversi enzimi per ottenere una legatura senza soluzione di continuità."

Formula: Inserisci massa = (Massa vettore × [Dimensione inserimento / Dimensione vettore]) × Rapporto

Used with this

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Acri all'ora

Calcola la velocità di lavoro sul campo e la capacità delle attrezzature agricole.

Frequenza allelica

Calcolare le frequenze alleliche e genotipiche all'interno di una popolazione utilizzando il modello di equilibrio di Hardy-Weinberg.

Calcolatore della gestazione dell'alpaca

Stimare la data di creazione (nascita) dei tuoi alpaca e monitorare i progressi della gravidanza.

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Includere sempre un controllo "Solo vettore" (con ligasi) per verificare lo sfondo dell'autolegatura.

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