Oznaczyć ilościowo białka w roztworze, stosując absorbancję spektrofotometryczną (A280) lub metodę korekcji Warburga-Christiana.
Spektrofotometria
Kwantyfikacja białek
0.750mg/mL
Stężenie białka
In 10 μL7.5μg
A260/A2800.50ratio
Beer-Lambert Projection
Overview
Ilościowe oznaczanie białek za pomocą absorbancji przy 280 nm jest metodą nieniszczącą opartą na aminokwasach aromatycznych (Trp, Tyr) i wiązaniach dwusiarczkowych obecnych w próbce.
💡
Pro Tips
Metoda A280: Najlepsza dla oczyszczonych białek o znanym współczynniku ekstynkcji.
Warburg-Christian: Najlepiej, gdy podejrzewa się zanieczyszczenie kwasem nukleinowym (stosując stosunek A260/A280).
Najdokładniejsze wyniki uzyskuje się w zakresie od 0,1 do 1,5 jednostek absorbancji.
Zawsze zeruj spektrofotometr z odpowiednią ślepą próbą buforową.
!
Fun Facts
"A280 opiera się na resztach tryptofanu i tyrozyny; białek, których ich brakuje, nie można zmierzyć w ten sposób."
"Czyste białko ma zazwyczaj stosunek A260/A280 > 1,8; niższe wartości sugerują zanieczyszczenie DNA/RNA."
"Metoda jest nieniszcząca i pozwala na odzyskanie próbki."
