Temperatura de recozimento

Determine a temperatura ideal de recozimento PCR com base no primer e nos pontos de fusão do DNA alvo.

Parâmetros térmicos

Primer Tm (ponto de fusão)

Unit

DNA alvo Tm

Unit

Configuração PCR

66.8°C

Temperatura ideal de recozimento

Primer Tm65.5°C

Ta (Tm-5)60.5°C

Method Comparison

Rychlik (Used)66.8°C

Standard (Tm - 5)60.5°C

*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

Overview

A temperatura de recozimento (Ta) é a etapa crítica na PCR onde os primers se ligam ao DNA alvo. Esta temperatura deve ser equilibrada: alta o suficiente para garantir que os primers se liguem apenas à combinação perfeita (especificidade), mas baixa o suficiente para eficiência. Esta calculadora utiliza a fórmula Rychlik, que considera tanto o primer quanto a estabilidade do produto.

💡

Pro Tips

A Ta ideal é normalmente 3-5°C abaixo da Tm inferior do seu par de primers.
Se você observar “manchas” inespecíficas ou faixas extras, tente aumentar a Ta em 1-2°C.
Se não tiver produto, diminua a Ta. Seus primers podem não estar conseguindo se ligar.
Um conteúdo de GC de 40-60% é ideal para primers para evitar estruturas secundárias ou ligações fracas.
O Touchdown PCR começa com uma Ta alta e diminui a cada ciclo, garantindo que a ligação mais específica ocorra primeiro.

Fun Facts

"A Taq Polimerase, a enzima que alimenta a PCR, vem de Thermus aquaticus, uma bactéria encontrada nas fontes termais do Parque Nacional de Yellowstone."
"A invenção da PCR por Kary Mullis em 1983 rendeu-lhe o Prêmio Nobel de Química."
"Antes dos termocicladores automatizados, os cientistas tinham que mover manualmente os tubos entre três banhos-maria de temperaturas diferentes!"
"As enzimas modernas 'Fast PCR' podem completar 40 ciclos em menos de 15 minutos."

Formula: Ta = 0,3 × Tm (primer) + 0,7 × Tm (alvo) - 14,9

Used with this

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Calcule a velocidade de trabalho de campo e a capacidade de equipamentos agrícolas.

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Calcule as frequências de alelos e genótipos dentro de uma população usando o modelo de equilíbrio de Hardy-Weinberg.

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Estime a data de criação (nascimento) de suas alpacas e acompanhe o progresso da gravidez.

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Primer Tm65.5°C

Ta (Tm-5)60.5°C

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Rychlik (Used)66.8°C

Standard (Tm - 5)60.5°C

*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

Overview

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Pro Tips

A Ta ideal é normalmente 3-5°C abaixo da Tm inferior do seu par de primers.
Se você observar “manchas” inespecíficas ou faixas extras, tente aumentar a Ta em 1-2°C.
Se não tiver produto, diminua a Ta. Seus primers podem não estar conseguindo se ligar.
Um conteúdo de GC de 40-60% é ideal para primers para evitar estruturas secundárias ou ligações fracas.
O Touchdown PCR começa com uma Ta alta e diminui a cada ciclo, garantindo que a ligação mais específica ocorra primeiro.

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"A Taq Polimerase, a enzima que alimenta a PCR, vem de Thermus aquaticus, uma bactéria encontrada nas fontes termais do Parque Nacional de Yellowstone."
"A invenção da PCR por Kary Mullis em 1983 rendeu-lhe o Prêmio Nobel de Química."
"Antes dos termocicladores automatizados, os cientistas tinham que mover manualmente os tubos entre três banhos-maria de temperaturas diferentes!"
"As enzimas modernas 'Fast PCR' podem completar 40 ciclos em menos de 15 minutos."

Formula: Ta = 0,3 × Tm (primer) + 0,7 × Tm (alvo) - 14,9

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