Количественное определение белков в растворе с использованием спектрофотометрического поглощения (A280) или метода коррекции Варбурга-Кристиан.
Спектрофотометрия
Количественное определение белка
0.750mg/mL
Концентрация белка
In 10 μL7.5μg
A260/A2800.50ratio
Beer-Lambert Projection
Overview
Количественное определение белка по поглощению при 280 нм представляет собой неразрушающий метод, основанный на ароматических аминокислотах (Trp, Tyr) и дисульфидных связях, присутствующих в образце.
💡
Pro Tips
Метод A280: лучше всего подходит для очищенных белков с известным коэффициентом экстинкции.
Варбург-Кристиан: Лучше всего при подозрении на загрязнение нуклеиновыми кислотами (с использованием соотношения А260/А280).
Наиболее точные результаты получаются при значениях поглощения от 0,1 до 1,5 единиц.
Всегда обнуляйте спектрофотометр с помощью соответствующего бланка буфера.
!
Fun Facts
"A280 основан на остатках триптофана и тирозина; белки, в которых они отсутствуют, не могут быть измерены таким способом."
"Чистый белок обычно имеет соотношение А260/А280 > 1,8; более низкие значения предполагают загрязнение ДНК/РНК."
"Метод неразрушающий и позволяет восстанавливать образцы."
