Tavlama Sıcaklığı

Astar ve hedef DNA erime noktalarına göre en uygun PCR tavlama sıcaklığını belirleyin.

Termal Parametreler

Primer Tm (Erime Noktası)

Unit

Hedef DNA Tm

Unit

PCR Yapılandırması

66.8°C

Optimum Tavlama Sıcaklığı

Astar Tm65.5°C

Ta (Tm-5)60.5°C

Method Comparison

Rychlik (Used)66.8°C

Standard (Tm - 5)60.5°C

*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

Overview

Tavlama sıcaklığı (Ta), primerlerin hedef DNA'ya bağlandığı PCR'deki kritik adımdır. Bu sıcaklık dengelenmelidir: Primerlerin yalnızca mükemmel eşleşmeye (özgüllük) bağlanmasını sağlayacak kadar yüksek, ancak verimlilik için yeterince düşük. Bu hesaplayıcı, hem astarın hem de ürünün stabilitesini dikkate alan Rychlik formülünü kullanır.

💡

Pro Tips

Optimal Ta tipik olarak primer çiftinizin alt Tm değerinin 3-5°C altındadır.
Spesifik olmayan 'lekeler' veya ekstra bantlar görürseniz Ta'yı 1-2°C artırmayı deneyin.
Ürününüz yoksa Ta'yı azaltın. Primerleriniz bağlanamıyor olabilir.
Primerlerin ikincil yapılardan veya zayıf bağlanmadan kaçınması için %40-60'lık bir GC içeriği idealdir.
Touchdown PCR yüksek bir Ta ile başlar ve her döngüde bunu azaltarak en spesifik bağlanmanın ilk önce gerçekleşmesini sağlar.

Fun Facts

"PCR'ye güç veren enzim olan Taq Polimeraz, Yellowstone Milli Parkı'nın kaplıcalarında bulunan bir bakteri olan Thermus Aquacusus'tan geliyor."
"PCR'nin 1983 yılında Kary Mullis tarafından icadı ona Nobel Kimya Ödülü'nü kazandırdı."
"Otomatik ısı döngüleyicilerden önce, bilim adamları tüpleri farklı sıcaklıklardaki üç su banyosu arasında manuel olarak taşımak zorundaydı!"
"Modern 'Hızlı PCR' enzimleri 40 döngüyü 15 dakikanın altında tamamlayabiliyor."

Formula: Ta = 0,3 × Tm(astar) + 0,7 × Tm(hedef) - 14,9

Used with this

Similar tools that might be useful

Saat Başına Dönüm

Çiftlik ekipmanları için saha çalışma hızını ve kapasitesini hesaplayın.

Alel Frekansı

Hardy-Weinberg denge modelini kullanarak bir popülasyondaki alel ve genotip frekanslarını hesaplayın.

Alpaka Gebelik Hesaplayıcısı

Alpakalarınızın doğum (doğum) tarihini tahmin edin ve hamilelik sürecini takip edin.

Tavlama Sıcaklığı

Astar ve hedef DNA erime noktalarına göre en uygun PCR tavlama sıcaklığını belirleyin.

Termal Parametreler

Primer Tm (Erime Noktası)

Unit

Hedef DNA Tm

Unit

PCR Yapılandırması

66.8°C

Optimum Tavlama Sıcaklığı

Astar Tm65.5°C

Ta (Tm-5)60.5°C

Method Comparison

Rychlik (Used)66.8°C

Standard (Tm - 5)60.5°C

*The Rychlik formula is generally more accurate for complex targets.

Overview

💡

Pro Tips

Optimal Ta tipik olarak primer çiftinizin alt Tm değerinin 3-5°C altındadır.
Spesifik olmayan 'lekeler' veya ekstra bantlar görürseniz Ta'yı 1-2°C artırmayı deneyin.
Ürününüz yoksa Ta'yı azaltın. Primerleriniz bağlanamıyor olabilir.
Primerlerin ikincil yapılardan veya zayıf bağlanmadan kaçınması için %40-60'lık bir GC içeriği idealdir.
Touchdown PCR yüksek bir Ta ile başlar ve her döngüde bunu azaltarak en spesifik bağlanmanın ilk önce gerçekleşmesini sağlar.

Fun Facts

"PCR'ye güç veren enzim olan Taq Polimeraz, Yellowstone Milli Parkı'nın kaplıcalarında bulunan bir bakteri olan Thermus Aquacusus'tan geliyor."
"PCR'nin 1983 yılında Kary Mullis tarafından icadı ona Nobel Kimya Ödülü'nü kazandırdı."
"Otomatik ısı döngüleyicilerden önce, bilim adamları tüpleri farklı sıcaklıklardaki üç su banyosu arasında manuel olarak taşımak zorundaydı!"
"Modern 'Hızlı PCR' enzimleri 40 döngüyü 15 dakikanın altında tamamlayabiliyor."

Formula: Ta = 0,3 × Tm(astar) + 0,7 × Tm(hedef) - 14,9

Used with this

Similar tools that might be useful

Saat Başına Dönüm

Çiftlik ekipmanları için saha çalışma hızını ve kapasitesini hesaplayın.

Alel Frekansı

Hardy-Weinberg denge modelini kullanarak bir popülasyondaki alel ve genotip frekanslarını hesaplayın.

Alpaka Gebelik Hesaplayıcısı

Alpakalarınızın doğum (doğum) tarihini tahmin edin ve hamilelik sürecini takip edin.