Oblicz stężenie kwasu nukleinowego z odczytów spektrofotometru A260, korzystając z prawa Beera-Lamberta.
Odczyt parametrów
Wynik stężenia
25.00µg/ml
Obliczone stężenie
Czynnik wymierania50µg/unit
Absorbance0.5AU
Krzywa koncentracji
Overview
Określanie stężenia kwasów nukleinowych (DNA i RNA) ma fundamentalne znaczenie w biologii molekularnej. Oblicza się to za pomocą prawa Beera-Lamberta w oparciu o absorbancję przy 260 nm. Współczynniki standardowe reprezentują stężenie wymagane do wytworzenia A260 o wartości 1,0 przy długości ścieżki 1 cm.
💡
Pro Tips
Współczynnik konwersji dsDNA: 50 µg/ml na 1,0 jednostkę A260.
Współczynnik konwersji ssDNA: 33 µg/ml na 1,0 jednostkę A260.
Współczynnik konwersji RNA: 40 µg/ml na 1,0 jednostkę A260.
Stosunek A260/A280 wynoszący ~1,8 jest ogólnie akceptowany jako „czysty” w przypadku DNA, podczas gdy ~2,0 oznacza czysty w przypadku RNA.
Sprawdź także stosunek A260/A230; wartości poniżej 1,5 mogą wskazywać na zanieczyszczenie węglowodanami lub fenolem.
!
Fun Facts
"Kwasy nukleinowe absorbują światło UV o długości fali 260 nm ze względu na strukturę rezonansową ich zasad azotowych (A, T, C, G)."
"Friedrich Miescher po raz pierwszy wyizolował DNA w 1869 roku i nazwał go „nukleiną”."
"Spektrofotometry NanoDrop do małych objętości wykorzystują napięcie powierzchniowe do utrzymania kropli próbki o objętości 1–2 µl pomiędzy dwoma stojakami optycznymi."
"Prawo Beera-Lamberta zakłada zależność liniową, która często załamuje się przy bardzo wysokiej absorbancji (>2,0 AU)."
